各種抗體稀釋液的配置方法和配方！
點擊次數：2448 更新時間：2022-01-04
抗體作為免疫基礎實驗中常用的試劑，WB、IHC、IF、FC實驗應用中都會用到抗體，如何正確使用抗體，其中稀釋液的選擇非常重要，不同的生產廠家對抗體稀釋液的要求都不一樣，一般常見的稀釋液是自己配置5%脫脂奶粉或者5%BSA溶液。
各種抗體稀釋液的配置方法和配方！
辣根過氧化物酶標記抗體稀釋液的配制：
1%牛血清白蛋白(穩定劑)；
0.1%冷魚皮明膠(堵)；
0.05%硫柳汞(防腐劑)；
0.01MPBSpH7.2；
注：
1)抗體稀釋使用該緩沖區可以存儲在4oC 6個月未還原的結合活性。
2)不要用BSA或其他含血清試劑稀釋二抗因為他們可能與牛血清白蛋白或血清抗體的親和性降低。
3)用TBS稀釋二抗常常產生較弱的染色。所以用TBS只有抗體高背景染色和堿性磷酸酶標記抗體由于磷酸鹽抑制堿性磷酸酶的活性。
辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素稀釋液：
0.01MPBS，pH7.2；
0.05%硫柳汞(防腐劑)；
注：
抗體稀釋使用這個緩沖區可以存儲在4oC6個月未還原的結合活性。
AP鏈霉親和素稀釋液：
0.05TBS，pH值7.60.05%硫柳汞(防腐劑)；
注：
1)抗體稀釋使用該緩沖區可以存儲在4oC6個月未還原的結合活性。
2)PBS不能因為磷酸鹽抑制堿性磷酸酶的活性稀釋劑-美聯社。熒光染料(AvidinFITC標記的抗生物-素蛋白生物-素，德克薩斯紅，AMCA)
稀釋緩沖液：
0.01MPBS，pH7.20.05%硫柳汞(防腐劑)。
原抗體稀釋緩沖液：
1%牛血清白蛋白(穩定劑和阻塞)；
0.1%冷魚皮明膠；0.05%疊dan化鈉；
0.01MPBSpH7.2(pH7.6的TBS用于初級抗體稀釋液產生弱染色)；
注：
1)抗體稀釋使用該緩沖區可以存儲在4oC6個月未還原的結合活性。
2)這個緩沖區不能用于稀釋辣根過氧化物酶標記抗體的疊dan化鈉酶抑制劑。
使用時按照抗體效價(或個人優化條件)，將適量抗體加入抗體稀釋液即可。例如，效價為1：100時，可將10ul抗體加入到1ml抗體稀釋液中，充分混勻后即可使用。抗體現用現稀釋，稀釋后的抗體2-8℃可以短期保存，但抗體的效價會隨時間而降低。
